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细胞复苏的主要步骤及注意事项,有哪些?
来源于:上海beat365官网地址下载科技有限公司,浙江beat365官网地址下载科技有限公司 | 发布时间:2022/9/14 14:12:00

一、主要步骤:
①将冷冻管从液氮中取出,迅速投入37℃水浴融化,细胞融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率,复苏过程中一般细胞死亡率在20%~25%之间。
②迅速用酒精棉球擦拭冷冻管外部杀菌消毒,然后放置在冰浴上。
③小心开启瓶盖,把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中,然后把培养瓶移至培养箱,36℃~38℃培养1h,让细胞贴壁。
④细胞贴壁后,小心移弃培养基,主要是去掉DMSO(悬浮生长细胞要通过离心沉淀除去DMSO)、死细胞及其碎片,加5mL新鲜培养基,36℃~38℃培养。
⑤细胞培养24h后,更换新鲜培养基,继续培养直到形成单层,便可以传代。
⑥详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等。

二、注意事项:
1、注意无菌操作。
2、应在1-2min内使冻存液完全融化。如果复温速度太慢,则会造成细胞损伤。另外,细胞复苏后的操作最好在4℃冰浴中进行,以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。
3、细胞复苏过程中,升温的速率要大,把从液氮或-70℃冰箱中取出的细胞在最短的时间内放入水浴锅。
4、细胞放入水浴中注意用镊子夹住细胞冻存管并在水浴中不时晃动,使其受热均匀,并防止水浴时水进入细胞冻存管污染细胞。打开细胞冻存管之前要用酒精棉球将冻存管消毒并晾干。
5、液氮操作有一定的危险性,打开液氮罐取出细胞时,戴上防护眼镜。

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